本生焦點 ELISA試驗操作失利的主要原因

　　我們知道，ELISA測定中影響要素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在檢驗中除正常反響外，有時?？梢姷揭恍╁e誤結(jié)果(即假陽性或假陰性)，那么致使試驗不成功的主要原因有哪些咧?

　　，標本的影響：溶血標本及混有紅細胞的血清選用ELISA法檢測易發(fā)生假陽性。或許是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗刷過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍色，發(fā)生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。

　　第二，標本受細菌污染：因菌體中或許含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因而，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測定結(jié)果。

　　第三，標本保存不妥：在冰箱中保存過久的標本，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、構成假陽性;為克服上述攪擾，ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮收集;如不能當即測定，5d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不行激烈振動。

　　第四，標本凝結(jié)不全：在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝結(jié)時即強行離心別離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中能夠構成肉眼可見的纖維蛋白塊，易構成假陽性結(jié)果;因而血液標本收集后有必要使其充分凝結(jié)后再別離血清。

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