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qPCR系列 miRNA熒光定量PCR試劑盒

簡(jiǎn)要描述:qPCR系列 miRNA熒光定量PCR試劑盒 本生(天津)健康科技有限公司供應(yīng):移液器吸嘴,ELISA試劑盒,動(dòng)物血清,全系熒光定量PCR耗材,產(chǎn)品包括:PCR單管、八聯(lián)管、96孔板、384孔板。

  • 產(chǎn)品型號(hào):HRF0711
  • 產(chǎn)       地:天津市
  • 更新時(shí)間:2025-02-18
  • 訪  問(wèn)  量:172
詳細(xì)介紹
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qPCR系列  miRNA熒光定量PCR試劑盒 HRbio™ miRNA qPCR Kit miRNA熒光定量PCR試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

HRbio™ miRNA qPCR Kit miRNA熒光定量PCR試劑盒

HRF0711

50T


 

產(chǎn)品描述

        HRbio™ miRNA qPCR Kit采用 SYBR Green I嵌合熒光法的原理進(jìn)行miRNA的熒光定量檢測(cè)。本產(chǎn)品包含miRNA qPCR所需要的所有試劑,組分分別是:2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。其中2×miRNA qPCR Mix(含SYBR Green)是專門(mén)為miRNA熒光定量檢測(cè)而特別研發(fā)的新一代預(yù)混液形式的qPCR試劑。其中DNA polymerase采用的是抗體修飾的熱啟動(dòng)形式,配合特殊的buffer體系,使得反應(yīng)特異性更好,靈敏度更高,并且在更廣的范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

 

產(chǎn)品組分


編號(hào)

組分

HRF0711(125次×20 μl)

HRF071-A

2×miRNA qPCR Mix(with SYBR Green I)

1.25 mL

HRF071-B

Reverse primer(10μM)

55 μL


 

運(yùn)輸與保存方法

1.-20°C 避光保存至少 12 個(gè)月,使用前充分融解混勻。

2.2 ×miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)短期使用可放在 4°C,避免反復(fù)凍融。

3.Reverse primer(10μM )每次用完置-20°C 保存。

 

注意事項(xiàng)

1.miRNA 第一鏈cDNA 的加入量不要超過(guò)real time PCR 體積1/10。

2.對(duì)于特殊的檢測(cè)體系中,高含量的cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,根據(jù)所檢測(cè)miRNA 的豐度適當(dāng)?shù)南♂宑DNA(5-10倍或者100倍)。

3.本品中含有熒光染料Sybr Green I,保存本品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。

4.2 x miRNA qPCR Mix不含參比染料ROX,客戶并根據(jù)qPCR儀器技術(shù)指導(dǎo)決定是否需要加ROX參比染料,用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差

5.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

6.本產(chǎn)品僅作科研用途!

 

操作步驟

  1. 在室溫融化2 ×miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μM)。

  2. 使用時(shí)請(qǐng)將2 ×miRNA qPCR Mix上下顛倒輕輕均勻混合,避免起泡,并經(jīng)輕微離心后使用。如果試劑沒(méi)有混勻,其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。注:請(qǐng)不要使用振蕩器混勻。

  3. 按照下表組分冰上進(jìn)行反應(yīng)液的配制:


組分

體積(μL)

體積(μL)

終濃度

2×miRNA qPCR Mix

25

10

Forward Primer (10 μM)

1

0.4

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)

1

0.4

0.2 μM

miRNA第一鏈cDNA模板

X

X

-

無(wú)菌超純水

To 50

To 20

-


【注】: 使用前務(wù)必充分混勻, 避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。

a) 引物濃度:通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據(jù)情況在0.1- 1.0 μM之間進(jìn)行調(diào)整。

b) 模板濃度:如模板類型為未稀釋cDNA原液,使用體積不應(yīng)超過(guò)qPCR反應(yīng)總體積的1/10。

c) 模板稀釋:cDNA原液建議5- 10倍稀釋,最佳模板加入量以擴(kuò)增得到的CT值在20-30個(gè)循環(huán)為好。

d) 反應(yīng)體系:推薦使用20μL或50 μL ,以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。

e) 體系配制:請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制,并使用無(wú)核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管;推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

 

qPCR系列  miRNA熒光定量PCR試劑盒 PCR 循環(huán)(三步法)


循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間     

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

2-3 min

1

變性

94℃

10-20sec

35-45

退火

60°C

10-20 sec

延伸

72℃

20 sec

熔解曲線階段

儀器默認(rèn)設(shè)置          1


 

PCR 循環(huán)(步法)


循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間     

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

2-3 min

1

變性

94℃

10 sec

35-45

退火/延伸

60℃

30-34sec

熔解曲線階段

儀器默認(rèn)設(shè)置          1


【注】高特異性可選擇兩步法,高效率擴(kuò)增可選擇三步法。

a)  預(yù)變性時(shí)間: 根據(jù)不同模板和引物的具體情況可適當(dāng)縮短至 2 min。

b)  退火溫度和時(shí)間:請(qǐng)根據(jù)引物和目的基因的長(zhǎng)度進(jìn)行調(diào)整。

c)  熒光信號(hào)采集(★):請(qǐng)按照儀器使用說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)程序設(shè)置,幾種常見(jiàn)儀器的時(shí)間設(shè)定如下:

30sec 以上: Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 Fast;Roche Applied Science: LightCycler 480;Bio-Rad: CFX96

31sec 以上:Applied Biosystems: 7300

 

34sec 以上: Applied Biosystems: 7500

d)  熔解曲線: 通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。

貨號(hào)品名規(guī)格
HRF0011Taq DNA Polymerase  DNA聚合酶1000U
HRF0012Taq DNA Polymerase  DNA聚合酶5×1000U
HRF00212×HRbio™ Taq PCR Master Mix (Red)1mL
HRF00222×HRbio™ Taq PCR Master Mix (Red)5×1mL
HRF00232×HRbio™ Taq PCR Master Mix (Red)50×1mL
HRF00242×HRbio™ Taq PCR Master Mix (Red)100×1mL
HRF00252×HRbio™ Taq PCR Master Mix for PAGE1mL
HRF00262×HRbio™ Taq PCR Master Mix for PAGE5×1mL
HRF00272×HRbio PCR Master Mix(No Dye)1mL
HRF00282×HRbio PCR Master Mix(No Dye)5×1 mL
HRF0028L2×HRbio PCR Master Mix(No Dye)100×1 mL
HRF00292×HRbio™ PCR Master Mix (Green)1mL
HRF00302×HRbio™ PCR Master Mix (Green)5×1 mL
HRF0030L2×HRbio™ PCR Master Mix (Green)100×1 mL
HRF0031HRbio™ qPCR SYBR® Green Master Mix (No  Rox)1mL
HRF0032HRbio™ qPCR SYBR® Green Master Mix (No  Rox)5×1mL
HRF0033HRbio™ qPCR SYBR® Green Master Mix (No  Rox)50×1mL
HRF0041HRbio™ qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox  Plus)1mL
HRF0042HRbio™ qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox  Plus)5×1mL
HRF0043HRbio™ qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox  Plus)50×1mL
HRF0051HRbio™ qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox  Plus)1mL
HRF0052HRbio™ qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox  Plus)5×1mL
HRF0053HRbio™ qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox  Plus)50×1mL
HRF0061HRbio™   Universal qPCR SYBR Green Master Mix1mL
HRF0062HRbio™   Universal qPCR SYBR Green Master Mix5×1mL
HRF0063HRbio™   Universal qPCR SYBR Green Master Mix50×1mL
HRF0071HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG熱啟動(dòng)探針?lè)ǘ縋CR Mix(含抗體修飾熱啟動(dòng)酶  +hUDG)500T
HRF0081HRbio™ Hi-Fi High Fidelity DNA  Polymerase高保真DNA聚合酶10U
HRF0082HRbio™ Hi-Fi High Fidelity DNA  Polymerase高保真DNA聚合酶100U
HRF0083HRbio™ Hi-Fi High Fidelity DNA  Polymerase高保真DNA聚合酶500U
HRF0084HRbio™ Hi-Fi High Fidelity DNA  Polymerase高保真DNA聚合酶1000U
HRF0085Profusion™ DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶100U
HRF0086Profusion™ DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶500U
HRF0087Profusion™ DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶1000U
HRF00882×Profusion™ PCR Master Mix 超高保真酶預(yù)混液1mL
HRF00892×Profusion™ PCR Master Mix 超高保真酶預(yù)混液5×1mL




 


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