國(guó)產(chǎn)本生96孔板接種細(xì)胞步驟
 

　　為了做實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞鋪勻是常見(jiàn)的一種。然而，有許多人不是很成功，分布也不均勻:要么中間密集，周圍稀疏，要么周圍密集，中間禿頂。以下是利用96孔板把細(xì)胞鋪勻，希望對(duì)大家有用!

　　本生96孔板方法/步驟

　　1、通常，在96孔板的每個(gè)孔中加入100微升細(xì)胞懸浮液。 從底部附近的井的左側(cè)添加細(xì)胞懸浮液。  加入一半平板后，混合細(xì)胞懸液，不要再加入，繼續(xù)加入剩余的一半平板。  添加完所有板后，蓋上板，用左手輕輕握住板的左側(cè)，用右手輕輕輕敲板的右邊緣，注意抓力(我通常輕敲三次)。 如果它太強(qiáng)或太多次，細(xì)胞就會(huì)被濃縮和堆積。  順時(shí)針旋轉(zhuǎn)盤子(逆時(shí)針效果不好)，依次敲擊剩余的三面，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱中。

　　對(duì)于6孔板、12孔板或24孔板，我在個(gè)孔中加入少量無(wú)血清培養(yǎng)基，搖動(dòng)并滲透到整個(gè)孔的底部，然后用移液管槍將整個(gè)孔的底部吸到第二個(gè)孔中。用同樣的方法滲透到井底，同時(shí)模擬其它井，這樣整個(gè)井底都是濕的，細(xì)胞懸浮液將平放在整個(gè)井底。  加入細(xì)胞懸液時(shí)，可以避免中間加入更多細(xì)胞，中間加入更少細(xì)胞的現(xiàn)象，細(xì)胞分散更均勻。  注意，加入細(xì)胞懸液后，細(xì)胞懸液應(yīng)放在工作臺(tái)上靜置。這個(gè)方法有點(diǎn)慢，但是當(dāng)你熟練的時(shí)候它并不慢。也可以涂抹，但強(qiáng)度不如96孔板，效果不如96孔板，所以我放棄了滲透井底的方法。

　　2、加入細(xì)胞懸液后，抬起細(xì)胞培養(yǎng)板，從底部向上觀察光線，看細(xì)胞是否聚集。然后從底部敲擊以分散它。

　　3、如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器，建議用這個(gè)儀器輕微振蕩。 效果好，即振幅小、頻率高。

　　4、細(xì)胞應(yīng)該盡可能分散，大多數(shù)細(xì)胞處于單一狀態(tài)。離心后，*懸浮!有轉(zhuǎn)移到六孔板上的，就是震動(dòng)!搖晃時(shí)，不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)向，否則細(xì)胞會(huì)全部被帶到中間而不均勻!

　　5、當(dāng)一瓶細(xì)胞裝滿后，進(jìn)行正常處理。 將它均勻地吹進(jìn)培養(yǎng)瓶中，然后鋪上6孔板，每孔2ml。 涂抹后，不用觀察直接用酒精棉擦拭，然后放入培養(yǎng)箱中。  稍微向左三圈，向右三圈，先三圈，然后三圈?；旧希?4小時(shí)后，每個(gè)孔中的細(xì)胞將非常均勻。

　　6、計(jì)算所有所需的液體和細(xì)胞數(shù)量，混合均勻，并將其添加到六孔板中。 六孔板呈水平8字形波動(dòng)。 在顯微鏡下觀察。  如果不均勻，按照上述方法再次搖動(dòng)。如果細(xì)胞沒(méi)有計(jì)數(shù)并直接種植，在種植六孔板的過(guò)程中隨時(shí)搖動(dòng)混合瓶。 我通常順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)瓶子。

　　7、先上下移動(dòng)，然后在水平板上左右移動(dòng)，每個(gè)方向移動(dòng)5-6次，但關(guān)鍵是搖動(dòng)后直接放入培養(yǎng)箱，不要做太多的運(yùn)動(dòng)，如照鏡子，否則很容易在中間再次聚在一起。

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