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酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)的核心類型與應(yīng)用比較
以下是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)的核心類型及應(yīng)用比較,本生結(jié)合技術(shù)原理與典型場(chǎng)景分析:
1. 直接ELISA?
原理?:抗原直接包被于固相載體,酶標(biāo)一抗直接結(jié)合顯色?。
特點(diǎn)?:
優(yōu)點(diǎn)?:步驟少(僅需一抗)、交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)低?。
缺點(diǎn)?:信號(hào)較弱,每種抗體需單獨(dú)標(biāo)記?。
應(yīng)用?:
高豐度抗原檢測(cè)(如病毒顆粒、重組蛋白)?。
細(xì)菌表面抗原(如LPS)快速篩查?。
2. 間接ELISA?
原理?:未標(biāo)記一抗結(jié)合抗原后,酶標(biāo)二抗放大信號(hào)?。
特點(diǎn)?:
優(yōu)點(diǎn)?:信號(hào)強(qiáng)度提升5-10倍,適合多抗體檢測(cè)?。
缺點(diǎn)?:步驟較多,二抗可能引發(fā)交叉反應(yīng)?。
應(yīng)用?:
抗體滴度測(cè)定。
自身免疫病篩查(如抗核抗體)?。
3. 夾心ELISA?
原理?:雙抗體夾心結(jié)構(gòu)(捕獲抗體+檢測(cè)抗體)?。
特點(diǎn)?:
優(yōu)點(diǎn)?:靈敏度達(dá)pg/mL級(jí),特異性強(qiáng)(需雙表位)?。
缺點(diǎn)?:抗原需足夠大(≥兩個(gè)表位),需配對(duì)抗體?。
應(yīng)用?:
微量蛋白檢測(cè)(如IL-6、TNF-α)?。
腫瘤標(biāo)志物定量(如CEA、PSA)?。
4. 競(jìng)爭(zhēng)ELISA?
原理?:樣本抗原與標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限抗體,信號(hào)與濃度負(fù)相關(guān)?。
特點(diǎn)?:
優(yōu)點(diǎn)?:適合小分子(半抗原),基質(zhì)耐受性好?。
缺點(diǎn)?:信號(hào)與濃度負(fù)相關(guān),優(yōu)化復(fù)雜?。
應(yīng)用?:
小分子檢測(cè)(如激素、藥物濃度)?。
環(huán)境污染物(如農(nóng)藥殘留)?。
類型選擇建議?
檢測(cè)目標(biāo)特性? ?推薦類型?
大分子抗原(>10 kDa) 直接ELISA/夾心ELISA
抗體滴度測(cè)定 間接ELISA
低豐度蛋白(pg級(jí)) 夾心ELISA
小分子(<1 kDa) 競(jìng)爭(zhēng)ELISA
如需進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),可結(jié)合樣本特性與檢測(cè)目標(biāo)選擇適配方法?。
注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。
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