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Elisa實(shí)驗(yàn):elisa原理及實(shí)驗(yàn)前注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2023-08-25    點(diǎn)擊次數(shù):1798

  Elisa實(shí)驗(yàn):elisa原理及實(shí)驗(yàn)前注意事項(xiàng)


  elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)前注意事項(xiàng):

  一、操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。

  二、正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。

  三、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孑L間竄流,造成孔問(wèn)污染,導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性。

  四、要保證加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn),造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯(cuò)誤。

  五、顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng),顯色液量不能過(guò)多,以免顯色過(guò)強(qiáng)。


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  elisa實(shí)驗(yàn)的原理:

  ELISA實(shí)驗(yàn)原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合,此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性,也不影響酶的生物學(xué)活性。酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色氧化型,出現(xiàn)顏色反應(yīng)。

  因此,可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng),顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定,這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái),使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。

  擴(kuò)展資料:

  ELISA實(shí)驗(yàn)基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應(yīng)板 ) 表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測(cè)大分子抗原,后者用于測(cè)定特異抗體。

  ELISA方法已被廣泛應(yīng)用于多種細(xì)菌和病毒等疾病的診斷。在動(dòng)物檢疫方面,ELISA在豬傳染性胃腸炎、牛副結(jié)核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽狂犬病、藍(lán)舌病等的診斷中已為廣泛采用的標(biāo)準(zhǔn)方法。

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